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数据非依赖性采集(DIA)蛋白质组学几乎完全依赖束型碰撞诱导解离(HCD),因为其较短的活化时间能够支持DIA所需的快速采集速率。然而,HCD需要进行电荷态校准,因此对于混合电荷态的DIA隔离窗口而言并不完美。共振激发碰撞诱导解离(reCID)为DIA提供了一个有前景的HCD替代方案,因为其离子活化在实际上基本不依赖于电荷态。历史上,reCID较长的活化时间一直被认为对于DIA而言过于缓慢。在本研究中,我们利用一台经过改造的Orbitrap Tribrid Apex MultiOmics质谱仪(Apex)重新评估了reCID在DIA蛋白质组学中的应用。该仪器可将采集矩阵的额外开销回收为额外的离子注入时间,从而使reCID的采集速率可与HCD相当。在对胰蛋白酶消化的HeLa样品进行匹配采集速率设置的条件下,当结合使用经Carafe精细调优、与碎裂方式匹配的谱库时,reCID在前体离子和蛋白鉴定数量上达到了与HCD相似的水平。谱库精细调优对reCID前体离子检出的提升幅度大于对HCD检出的提升,分别为24%和5%,这表明基于HCD训练的预测模型对于reCID谱图并非最优。reCID还保持了肽段水平的定量性能,包括每条肽段测得的离子数、精密度和准确度。在7种NCI癌症细胞系及其混合样品中,Apex平台上reCID与HCD方法所得的蛋白丰度排序高度一致,并且在Orbitrap Astral Zoom平台之间也表现出高度一致性。这些结果表明,reCID可作为DIA蛋白质组学中一种实用的碎裂模式。
重新审视用于数据非依赖性采集的共振激发碰撞诱导解离 | bioRxiv
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重新审视用于数据非依赖性采集的共振激发碰撞诱导解离
Chris Hsu, Lilian R Heil, Bo Wen, Graeme C McAlister, Gennifer E. E Merrihew, Philip Remes, Deanna L Plubell, Rafael D Melani, Vlad Zabrouskov, Michael J. MacCoss
doi: https://doi.org/10.64898/2026.05.31.729078
Chris Hsu 1 华盛顿大学; 在 Google Scholar 上查找该作者 在 PubMed 上查找该作者 在持有人为作者/资助方,其已授予 bioRxiv 永久展示该预印本的许可。 本文依据 CC-BY 4.0 国际许可协议公开提供。
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发表于 2026 年 6 月 3 日。
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Chris Hsu, Lilian R Heil, Bo Wen, Graeme C McAlister, Gennifer E. E Merrihew, Philip Remes, Deanna L Plubell, Rafael D Melani, Vlad Zabrouskov, Michael J. MacCoss
bioRxiv 2026.05.31.729078; doi: https://doi.org/10.64898/2026.05.31.729078
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Chris Hsu, Lilian R Heil, Bo Wen, Graeme C McAlister, Gennifer E. E Merrihew, Philip Remes, Deanna L Plubell, Rafael D Melani, Vlad Zabrouskov, Michael J. MacCoss
bioRxiv 2026.05.31.729078; doi: https://doi.org/10.64898/2026.05.31.729078
📄 原文链接:https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.05.31.729078v1?rss=1
🏷️ 蛋白质组学 数据非依赖采集 质谱分析 碰撞诱导解离 碎裂模式