跨膜蛋白68和二酰甘油酰基转移酶在脂肪合成和脂滴形成中的不同作用

目的 表征一条三酰甘油（TAG）生物合成替代途径中的跨膜蛋白68（TMEM68），并确定TMEM68与经典TAG合成酶酰基辅酶A∶二酰甘油酰基转移酶（DGAT）之间的相互作用。方法 通过比较DGAT抑制剂处理与否的脂滴形态、油红O染色面积以及TAG水平，研究外源脂肪酸和单酰甘油对TMEM68过表达和敲除细胞的TAG合成和脂滴形成的影响。脂滴采用荧光染料染色并使用共聚焦荧光显微术观察。TAG水平使用基于酶法的脂肪检测试剂盒测定。TMEM68和DGAT1的共定位通过共表达和共聚焦荧光显微术检测，并采用免疫共沉淀检测它们的相互作用。采用逆转录定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测DGAT1的表达。结果 TMEM68催化的TAG合成不依赖DGAT活性。在人神经母细胞瘤细胞中，外源脂肪酸和单酰基甘油主要通过DGAT促进TAG合成。TMEM68与DGAT形成的脂滴具有不同的形态。此外，TMEM68和DGAT1在同一内质网（ER）区室共定位，但不发生物理相互作用。TMEM68的过表达降低了参与TAG合成的主要DGAT酶DGAT1的表达，然而TMEM68敲除没有影响。结论 TMEM68介导的TAG合成途径具有不同于经典DGAT通路的特征，然而TMEM68和DGAT可能共同调控细胞内TAG水平。