基于电子顺磁共振技术的谷胱甘肽检测方法

目的 谷胱甘肽（GSH）是细胞中巯基（―SH）含量最丰富的非蛋白质化合物，在提供还原当量、直接中和有毒反应物质以及维持细胞氧化还原平衡等方面发挥着至关重要的作用，因此，准确检测组织中的GSH含量具有重要意义。鉴于电子顺磁共振（EPR）技术在GSH检测方面的应用报道相对较少，本文提出了一种基于EPR技术的GSH检测方法。方法 首先，将ABTS（2，2"-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）溶液与K2S2O8溶液混合并在避光条件下反应12~16 h制备ABTS?⁺溶液，借助UV-Vis对ABTS?⁺溶液进行浓度测定。然后，基于ABTS?⁺的EPR信号变化来检测GSH浓度，在此基础上探究最适的反应时间和温度，建立ABTS?⁺的EPR信号强度和GSH 浓度之间的标准方程。最后，采用计算得到的标准曲线对C57BL/6J 小鼠全血的GSH浓度进行定量分析，并与文献结果进行比较，验证方法的准确性。结果 实验结果显示，本方法对GSH的检测范围（50 nmol/L~15 μmol/L）分布超过两个数量级，检测限（LOD）低至0.50 nmol/L，检测到的小鼠全血中GSH含量为（10 660±706）nmol/g（每克血红蛋白所含GSH纳摩尔数），与文献报道结果（（11 200±237）nmol/g）接近。此外我们还使用类似的方法进一步发展了对GSSG的检测方法。结论 本文提出了一种基于EPR技术，使用ABTS?⁺快速检测GSH的方法。得益于EPR技术的独特优势，相比于传统的比色法，本方法具有更高的检测灵敏度，更宽的线性范围。我们进一步拓展了其在血液样品中的检测应用，可以快速准确地检测全血中GSH的含量，为衡量组织中氧化还原平衡状态提供数据支持，具有重要意义。