SHERLOCK-HBA检测方法的建立及其在血液鉴别中的应用

目的 基于规律成簇的间隔短回文重复（CRISPR）/CRISPR关联蛋白质系统（Cas）技术建立检测血液特异性血红蛋白α（HBA）mRNA的方法，以准确、快速地鉴定血液样本。方法 本研究通过设计和筛选血液特异性HBA mRNA上的CRISPR RNA（crRNA）短片段，基于CRISPR/Cas技术原理建立了SHERLOCK-HBA检测方法，对5种体液（包括外周血、月经血、唾液、阴道分泌液、精液）共79份样本进行检测以评价所建方法鉴别血液的能力，并通过种属特异性实验、灵敏度实验、模拟混合斑检测、模拟降解样本检测、实际案件样本检测等进一步验证实验体系的法医学应用能力。结果 该方法检测人源血液的相对荧光单位（RFU）值显著高于非血液（P0.000 1）以及非人源血液样本（P-3 ng，且可成功检测出混合斑迹以及陈旧降解斑迹中的微量血液成分。结论 本研究成功建立了一种基于CRISPR/Cas技术的SHERLOCK-HBA检测体系，能准确、灵敏地鉴定血液，操作简单、快速，为快速识别血液类样本提供了新的思路和参考。