微流控法制备载卵母细胞水凝胶微球及其玻璃化保存

目的 通过微流控法制备载卵母细胞海藻酸钠微球，在低浓度保护剂下实现卵母细胞玻璃化保存。方法 采用流动聚焦型微流控芯片，通过调整芯片结构、海藻酸钠溶液浓度和流速比，制备大小均匀、空包率低、低温耐受的载卵母细胞海藻酸钠水凝胶微球。在低浓度低温保护剂下将微球玻璃化保存，复温后检测存活率，采用细胞松弛素B和氯化锶孤雌激活卵母细胞，与Cryotop玻璃化法对比卵母细胞存活率和卵裂率、囊胚率。结果 制备的海藻酸钠微球在冷冻复温前后的体积稳定且结构完整，在将卵母细胞包封在海藻酸钠水凝胶中后，空包率低，存活率、卵裂率和囊胚率与新鲜组相比无显著差异。在低浓度低温保护剂10% DMSO+10%乙二醇（EG）+0.5 mol/L海藻糖中玻璃化冻存后卵母细胞的存活率达到92.48%，卵裂率70.80%，囊胚率20.42%，与高浓度保护剂15% DMSO+15% EG+0.5 mol/L海藻糖中Cryotop玻璃化法相比无显著性差异。结论 本文设计制作了三通道内部交联芯片并用于卵母细胞玻璃化保存的微流控系统，可生成大小均匀、空包率低、低温耐受的载卵母细胞海藻酸钠水凝胶微球，在低浓度保护剂下实现玻璃化保存，为卵母细胞玻璃化保存方法提供新思路。