抗菌肽Cathelicidin-1真核表达及发酵液抑菌活性鉴定

为了获得体外表达的高活性抗菌肽，通过分子克隆技术构建了抗菌肽Cathelicidin-1重组载体，在毕赤酵母(<i<Pichia pastoris</i<) GS115中表达，并鉴定包含该抗菌肽的发酵液的抑菌活性。通过DNA全合成技术合成编码抗菌肽Cathelicidin-1的全长基因，采用PCR技术扩增靶标基因并与真核表达载体pGAPZαA连接，获得重组质粒pGAPZαA- Cathelicidin-1；将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α中扩增，提取质粒并经单酶切处理后转化毕赤酵母GS115；使用YPD培养基培养酵母，72 h后收集发酵液，通过Tricine-SDS-PAGE检测抗菌肽表达，并通过抑菌圈与抑菌曲线测定鉴定发酵液的抑菌活性。结果表明，抗菌肽Cathelicidin-1以分泌肽形式表达于发酵液中，并且该发酵液能够显著抑制大肠杆菌（<i<Escherichia coli</i<）的生长，而对金黄色葡萄球菌（<i<Staphylococcus aureus</i<）则无明显抑菌效果。