大豆成熟种子萌发叶片体细胞胚的高频诱导和遗传转化

目的 虽然大豆遗传转化取得了较大进展，但其转化效率仍然偏低。因此，有必要建立一个更加简单和高效的大豆转化系统。本研究的目的是以大豆成熟种子萌发产生的叶片（MSDL）为靶外植体，高频诱导和转化大豆体细胞胚（somatic embryos，SEs）。方法 萌发7 d的大豆幼苗上摘取叶片，并将其切成1.2 cm×1.2 cm的外植体。将叶片外植体置于胚胎诱导培养基（EIM）上诱导体细胞胚发生。将叶片外植体浸入携带pCAMBIA1301植物表达载体的农杆菌EHA105菌液进行遗传转化。结果 MSDL（包括初生叶和次生叶）均能被诱导产生SEs。大多数SE发生在叶片切口处。所试的不同基因型均能诱导SEs。SEs的最高诱导率为95.0%。β葡糖醛酸糖苷酶（GUS）染色结果表明，平均转化效率达到75.4%。DNA印迹（Southern blot）结果表明，目的基因稳定整合在大豆基因组中，拷贝数为1~3个。结论 本研究建立了以大豆MSDL为靶组织的体细胞胚高频诱导和遗传转化。该系统有望在大豆基因组编辑技术的开发上得到应用。