高内涵分析系统联合激光扫描共聚焦显微镜观察细胞间隧道纳米管

目的 隧道纳米管（tunneling nanotubes，TNTs）是存在于细胞间的膜管样结构，具有直接且远距离的生物信息交换功能。TNTs因结构易破坏、存在时间短以及形成后不稳定，故观察其动态形成与功能存在一定难度。而本研究采用高内涵分析系统（HCA）联合激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）尝试观察TNTs形成的动态过程及其对囊泡物质的转运功能。方法 荧光探针标记人肺腺癌A549及顺铂耐药A549/DDP细胞，分别利用HCA观察TNTs形成过程、LSCM观察TNTs三维结构、HCA联合LSCM分析TNTs囊泡物质转运功能。结果 同种肿瘤细胞（A549或A549/DDP）间、不同亚型肿瘤细胞（A549与A549/DDP）间均可形成TNTs结构；与A549细胞相比，A549/DDP细胞间TNTs结构长且粗、形成指数高（A549和A549/DDP细胞TNTs长度、直径和形成指数分别为14.71 μm、2.27 μm、4和25.44 μm、2.59 μm、11）；肿瘤细胞间通过细胞接触-膜融合-细胞反向易位-胞膜融合区拉长变细，以及细胞膜凸起-膜凸起丝状伪足样拉长-膜凸起与其他细胞膜/膜凸起融合两种方式形成TNTs；TNTs囊泡转运功能具有双向性，囊泡转运速率及数量因转运阶段和供体细胞不同而存在差异，A549/DDP细胞向A549细胞进行囊泡转运过程中表现为囊泡转运速率初始快、末期慢，A549作为供体细胞向受体A549/DDP细胞转运的囊泡数量和比例高于A549/DDP作为供体细胞的反向转运。结论 HCA联合LSCM可有效观察、分析TNTs动态形成过程及囊泡物质转运功能。