小鼠睾丸组织慢速冷冻保存工艺的优化研究

目的 冷冻保存睾丸组织用于后期移植，是除精子冻存以外保持男性生育力的另一有效途径。本文对块状睾丸组织常用的慢速冷冻降温程序进行了改进。方法 通过缩短保护剂加载时间、提高第一阶段的冷却速率、第二阶段直接投入液氮等方法对小鼠睾丸组织进行冷冻保存。在不同温度对小鼠睾丸组织冻存体系进行诱导冰晶成核并冻存，降低睾丸组织慢速冷冻保存所需保护剂浓度。结果 改进的两步法冻后组织内生殖细胞的凋亡阴性率均较高，其中精原细胞98.4%、精母细胞99.2%、精子细胞88.4%、支持细胞98.1%，显著高于常用慢速冷冻组，与对照组均无显著性差异。相比于未置核组， -10℃置核可显著提高5% DMSO保护剂慢速冷冻保存的冻后效果，生殖细胞的凋亡阴性率为精原细胞82.9%、精子细胞92.1%、精母细胞93.2%及支持细胞88.9%，与较高浓度保护剂10% DMSO组冻存结果无显著性差异，说明置核能够降低所需保护剂的浓度，降低毒性损伤。结论 本研究通过改进两步法和置核提高了小鼠睾丸组织冻后的质量，为临床上人睾丸组织的冻存提供参考。