斑节对虾<i<PmML1</i<和<i<PmML2</i<基因的鉴定及表达分析

为进一步了解ML家族基因在斑节对虾先天免疫中的作用，采用PCR和RACE方法克隆到斑节对虾(<i<Penaeus monodon</i<)2个ML家族基因<i<PmML1</i<和<i<PmML2</i<，并对其进行生物信息学分析，同时通过实时荧光定量PCR技术分析2个ML家族基因在斑节对虾各组织的表达分布。结果显示：<i<PmML1</i<的开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)为462 bp，编码153个氨基酸；<i<PmML2</i<的ORF为471 bp，编码156个氨基酸。2个基因都具有1个典型的ML家族蛋白结构域。多重比对结果显示，2个基因的ML结构域与组成3对二硫键的半胱氨酸残基位置都相对保守。氨基酸序列对比结果显示，PmML1和PmML2之间的相似性仅为42.37%。PmML1与日本囊对虾(<i<Marsupenaeus japonicus</i<)的ML蛋白MjML4的相似性最高，比例高达91.5%，PmML2与凡纳滨对虾(<i<Litopenaeus vannamei</i<)的ML蛋白相似性最高，比例高达88.46%。系统进化分析结果显示，<i<PmML1</i<和<i<PmML2</i<存在于2个不同的分支，说明2个基因的进化相对独立，证明本研究中鉴定到的是2个不同的基因。实时荧光定量PCR结果显示，<i<PmML1</i<在对虾眼柄中的表达量最高，其次为肠、胃、心、鳃、肌肉和肝胰腺，在血细胞的表达水平最低；<i<PmML2</i<在眼柄中表达量最高，其次为肠、鳃、胃、血细胞、心、肝胰腺和肌肉，在肌肉中的表达水平最低。眼柄是重要的神经内分泌调节器官，推测<i<PmML1</i<和<i<PmML2</i<可能在斑节对虾神经内分泌调控等过程中发挥重要作用。