穿心莲内酯恢复突变型p53野生型功能的作用及机制研究

目的 p53是人体内重要的肿瘤抑制因子，但在人类肿瘤中因高频突变而失去抑癌功能。突变型p53（mutant p53，mutp53）可促进肿瘤的发生、发展和转移。由于在肿瘤细胞中通常有较高表达，mutp53已成为区别于正常细胞的一个特异性抗肿瘤靶点。本研究旨在探索穿心莲内酯的抗肿瘤作用机制，为寻找靶向mutp53的抗肿瘤化合物提供理论依据。方法 构建可以快速筛选具有恢复mutp53下游转录因子的荧光素酶系统，观察穿心莲内酯对H1299-p53 R273H-PUMA-luciferase和H1299-p53R175H-PUMA-luciferase细胞中PUMA基因的表达情况；采用免疫荧光实验，检测穿心莲内酯对HT29（R273H）和SK-BR-3（R175H）细胞中mutp53的表达影响；采用免疫印迹实验进一步观察穿心莲内酯恢复了mutp53肿瘤细胞中p53下游靶蛋白PUMA、p21、Noxa的表达；随后采用MTT和流式细胞分析，检测穿心莲内酯对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响；此外，还通过siRNA敲低Hsp70表达后，研究穿心莲内酯对mutp53下游基因的重激活作用。结果 穿心莲内酯可以增加H1299-p53 R273H-PUMA-luciferase和H1299-p53R175H-PUMA-luciferase细胞中PUMA基因的表达；穿心莲内酯可以降低HT29（R273H）和SK-BR-3（R175H）细胞中mutp53的比例，同时增加野生型p53的比例；穿心莲内酯恢复了mutp53肿瘤细胞中p53下游靶蛋白PUMA、p21、Noxa的表达，进而抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡；穿心莲内酯可以增加分子伴侣Hsp70的表达，通过siRNA敲低Hsp70后，穿心莲内酯对mutp53下游基因的重激活作用明显受到抑制。结论 穿心莲内酯可能通过影响Hsp70的表达从而激活突变p53下游靶基因而发挥抗肿瘤作用。