牛分枝杆菌Mb0950c的免疫特性及其血清学检测方法的建立

[目的] 利用原核表达系统对牛分枝杆菌Mb0950c蛋白进行表达和纯化，通过小鼠模型评价其免疫原性，建立血清学间接ELISA方法用于牛结核病的临床检测。[方法] 构建pET32a-Mb0950c原核表达质粒，并转化至BL21（DE3）中诱导蛋白的表达，对蛋白进行纯化。使用流式细胞术（flow cytometry，FCM）、ELISA等对该蛋白在小鼠中的免疫原性进行分析。建立基于Mb0950c的间接ELISA方法，评价该方法的临床检测潜力。[结果] SDS-PAGE和Western blotting结果显示，成功获得了可溶性Mb0950c蛋白，且具有良好免疫反应性；FCM结果显示，Mb0950c蛋白上调了T细胞表面CD69分子的表达。细胞因子和抗体结果表明，该蛋白能够诱导特异性的IFN-γ和IL-4的分泌，同时能诱导机体分泌特异性的抗体，且以IgG1型为主。建立了ELISA检测方法应用于牛结核临床检测，结果显示，该方法与牛结核外周血IFN-γ外释放试验和皮试试验结果的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为65.7%、97.9%和72.4%。[结论] 在原核表达系统中可溶性表达Mb0950c蛋白，它在小鼠模型中诱导Th1和Th2型免疫应答，基于此蛋白建立了牛结核病血清学检测的间接ELISA方法。